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B

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用通用缓冲液；先用低盐酶，后用高盐酶；先低温后高温。为了保护两种不同性质的酶。

酶切条件的改变会对限制性内切核酸酶的专一性造成影响，识别序列和切割都有一些变化，改变后的活性就是星号活力。诱发因素包括：甘油浓度大于5%；限制酶过量；低离子强度；高pH；有机溶剂的存在；非Mg²⁺的二价阳离子存在等。

反转录酶、DNA聚合酶、SI核酸酶、限制性内切核酸酶、连接酶。

采用缺失的方法，使野生型的酶失去3′→5′外切酶活性，保留聚合酶活性，聚合能力提高了数倍。属于序列测定专用酶。

Klenow酶又称DNA聚合酶Ⅰ大片段，是用枯草杆菌蛋白水解酶处理DNA聚合酶Ⅰ后，得到的一种分子质量为76kDa的大片段。该片段具有3′→5′外切酶活性和5′→3′聚合酶活性，失去了5′→3′外切酶活性。主要用途包括：补平DNA的突出单链末端；标记3′突出端；随机引物法标记DNA探针等。

首先利用T4 DNA聚合酶的3′→5′外切酶活性在无dNTP的条件下切割双链DNA，产生突出的5′端，然后加入放射性标记的dNTP，利用5′→3′聚合酶活性进行DNA合成，得到两端3′端都被标记的双链DNA。

复制起点、着丝粒和端粒。具有克隆数百碱基对DNA的能力。因此，利用它作载体构建基因文库可以显著减少克隆的数目，降低在因文库筛选的难度，同时也加快了染色体步移的速度。

复制起点、选择性标记、克隆位点。

两种质粒不能稳定共存于同一个细胞中的现象。同一不亲和群中的质粒具有相同的复制机制，相互间产生干扰。同时，细胞分裂时细胞质的不均等分配也是其原因之一。