一、简答题1. 试述PCR反应的基本原理和操作过程。
原理:利用DNA聚合酶在体外快速复制DNA。操作步骤:模板高温(90~95℃)变性—低温退火(55℃)—延伸。
2. 为什么IPTC能诱导Lac Operon表达?
3. 分子伴侣帮助新生肽链正确折叠的分子机制是什么?
分子伴侣可以识别和稳定多肽链的部分析叠构象,参与催化、介导蛋白质的折叠和寡聚体的组装。
4. PBR322和pUC质粒使用了相同类型的复制子,但前者在宿主细胞内只有15~20个拷贝,而后者可高达500~700个拷贝,为什么?
6. 如果已知细胞中有三个基因(
proA、proB、proC)参与脯氨酸的生物合成,那么,
proA+ proB+ proC+与pro有何不同?你能写出具有
proA
+proB
-proC
+的基因型吗?
proA+proB+proC+代表三种蛋白质或酶,Pro代表脯氨酸,proA+proB-proC+的基因型为proA+proB-proC+。
7. 为什么原核生物基因表达主要在转录水平受调控?
原核生物的基因组由裸露的DNA组成,单个分子,没有染色体结构,没有蛋白质合成后加工的细胞器。
8. 请说说σ因子及其功能。
σ因子是原核生物RNA聚合酶的核心酶以外的组分,其功能是识别DNA上的转录启动子,相对分子质量85000,由rpoD编码。
二、详答题1. 你已经克隆得到一个编码60kDa蛋白质A的cDNA,在体外转录、翻译系统中你又发现有一个与你的cDNA相互补的mRNA,但它编码了一个62.5kDa的蛋白质B,该蛋白质能够被蛋白质A的抗体所识别。你知道这一发现有什么意义吗?
这一发现意味着两种蛋白质的基因序列很可能重叠,也有可能是同源基因或同源蛋白,两种蛋白质的结构域很可能类似。
2. 你手中有一个cDNA克隆,如何才能克隆到其5'上游区的序列呢?
将手中的cDNA克隆标记成为探针,然后利用Souenten印迹技术查找与此杂交的预先专一水解DNA序列片段,通过电泳就可以从中找到你手中拥有的那一个cDNA克隆的5'上游区的序列。
3. 有两个基因在同一个转录信号的刺激下得到表达,合成两个蛋白质。在移去转录信号后,其中一个蛋白质的合成速度并没有发生大的变化,而另一个蛋白质的合成几乎停止了,请解释原因。
两个基因在同一个转录信号的刺激下得到表达,合成两个蛋白质。说明这两个基因的表达的调控彼此有相关性。在移去转录信号后,其中一个蛋白质的合成速度并没有发生大的变化,而另一个蛋白质的合成几乎停止了,说明这一转录信号的信使物质很可能直接控制另一种蛋白质的合成。也有可能是合成速度并没有发生大的变化的蛋白质另有其他的调控机理,还有可能是这一转录信号的信使物质对两种蛋白质基因表达的刺激有差异,转录信号通过第一种蛋白质(蛋白质-蛋白质相互作用)进一步发挥作用。
4. 你知道拟南芥基因组中共有多少条染色体?大概有多少个ORF?在不知道某个生物基因组全序列时,科学家是根据哪些原则来推测该生物单倍体细胞中所含有的ORF总数的?
5个,167325730bp,大概有25498。预测ORF的原则有:从mRNA和EST(expressed sequence tag,表达序列标签)得到直接证据;从已知的基因和蛋白质序列的同源性得到间接证据;基于隐马尔可夫模型的从头预测。
5. 科学家常用分子间相互作用技术研究不同蛋白质之间的关系,请简单说明该技术的原理。
蛋白质-蛋白质杂交分析,例如Westen bloting,首先将一种蛋白质吸附固定在滤膜上,然后用另一种标记蛋白质与其结合。结合在一起的两种蛋白质可以共结晶,然后进行X射线衍射分析,确定彼此相互作用的氨基酸残基之间的关系。蛋白质—蛋白质相互作用的分子基础是氨基酸残基之间形成次级键。