A

[考点] DNA双螺旋结构。
   [解析] 两条多核苷酸链并非以均匀螺旋形式相互缠绕，而是有一个大沟，一个小沟。

B

[考点] tRNA结构特点。
   [解析] 所有tRNA的3′端为CCA，是连接活化氨基酸的位点。tRNA的二级结构为三叶草形，含有识别mRNA密码子的反密码子。

D

[考点] DNA印迹技术。
   [解析] Southern Blot即DNA印迹技术，其基本原理是利用核酸分子杂交来检测DNA是否存在某段碱基序列。人们将类似的实验策略用于对RNA样品检测，并称之为“NorthernBlot”，即RNA印迹，这是一种将变性RNA转移到滤膜上，利用分子杂交原理研究基因表达规律的分析技术。“Western Blot”为蛋白质免疫印迹。

C

[考点] 核苷酸多样性。
   [解析] 核苷酸有多种，DNA中的核苷酸为5′-脱氧核糖核苷酸，它们之间靠3′，5′-磷酸二酯键相连。

A

[考点] 核酸连键共同性。
   [解析] 所有核酸分子都由核苷酸组成，连键性质一般都是3′，5′-磷酸二酯键。

D

[考点] 溴化乙锭的应用。
   [解析] 溴化乙锭(EB)为一扁平的小分子芳香环化合物，能够嵌入双链DNA中，在紫外光照射下发出红橙色(590/nm)荧光。RNA因为含有部分螺旋，也能用：EB显色。EB具有致癌作用，在使用时不要直接接触皮肤，有关废物要特别处理。

A

[考点] 核酸制品纯度的快速测定。
   [解析] 用紫外分光光度法可以对分离的DNA样品进行快速纯度鉴定和浓度估算。读出样品在260nm和280nm下的吸光值，从A₂₆₀/A₂₈₀的比值可判断样品的纯度。比较纯的DNA，A₂₆₀/A₂₈₀。一般为1.8～2.2。蛋白质或酚类物质在280nm有很强的吸收，核酸样品含有这些物质时，A₂₆₀/A₂₈₀值将明显降低。RNA因为以单链为主，光吸收值高，一般规定A₂₆₀/A₂₈₀值高于2.0才算纯度高。

B

[考点] 限制性内切酶的作用特点。
   [解析] 限制性内切酶的主要作用特点：①专用于降解异源DNA；②具有特异的识别序列；③同时水解DNA两条链，形成的DNA片段有平末端和粘末端两种。

A

[考点] 核酸变性。
   [解析] 天然核酸在某些物理、化学因素(如过酸、过碱、过热、变性剂等)作用下，双螺旋区会因氢键断裂变成单链，紫外吸收升高，黏度下降，生物活性丧失。这种现象称为核酸的变性。核酸变性时，碱基间的氢键和碱基堆积力受到破坏，但没有共价键的断裂。

C

[考点] 区分核酸T_m与酶的米氏常数。
   [解析] DNA热变性时双螺旋破坏一半时所需要的温度称为DNA熔解温度(melting temperature, T_m)，T_m越高，表明核酸分子C、G含量越高，热稳定性越大。K_m是酶的特征常数，K_m越小，表示酶与底物的亲和力越大。

A

[考点] 核酸构象与电泳迁移速度的关系。
   [解析] 构象不同的同种核酸分子在凝胶电泳时的迁移速度不同：超螺旋DNA＞线形DNA＞环状DNA。

A

[考点] DNA拓扑学。
   [解析] 双螺旋在发生拓扑结构变化时遵循一个规律：L=T+W。L为连接数，指超螺旋水平中一条链绕另一条链360°所形成的交叉数，是双螺旋数(T)和超螺旋数(W)之和。拓扑异构体是指同一双螺旋体的不同状态，它们的L值不同。分子量相同，不一定序列相同。

A

[考点] 核小体的概念。
   [解析] 核小体是真核生物染色质的重复结构单位，由DNA盘绕组蛋白核心而成。组蛋白核心为八聚体，含有各两个拷贝的H2A、H2B、H3和H4。盘绕组蛋白核心的DNA大约有200bp，其中146bp以左手超螺旋形式在组蛋白核心外部盘绕1.75圈，其余部分用作两个核小体之间的连接DNA，长度约54bp。

A

[考点] 核小体的概念。

D

[考点] DNA组成。
   [解析] DNA碱基组成ATCG，核糖在2′-脱氧。“d”表示脱氧。

D

[考点] DNA碱基组成规律与碱基修饰。
   [解析] DNA碱基在代谢中是发生变化的。另外，DNA分子碱基修饰是表观遗传学的分子基础。

B

[考点] mRNA的帽子结构。
   [解析] 5′帽子结构中存在3个磷酸基团，以5′→5′连接。

A

[考点] 核酸阅读方向和碱基互补。
   [解析] 按照从5′到3′的阅读规定，ACG即5′ACG3′，所对应mRNA序列是3′UGC5′，所以应是CGU。

D

[考点] RNA对弱碱的敏感性。
   [解析] RNA的磷酸酯键被稀碱解时，首先形成2′，3′-环磷酸酯，进一步水解产生3′-核苷酸、2′-核苷酸的混合物。

C

[考点] 核酸变性温度与碱基组成之间的关系。
   [解析] 影响T_m值的主要因素之一是DNA的碱基组成。C+G含量越高，T_m值越高，因为C≡G对有三个氢键，变性时比A=T对分离开需要较多的能量。

A

[考点] 核酸染色条带的观察技术。
   [解析] 核酸电泳时，通常在凝胶制备过程中加入EB，或在电泳完成后用含EB的水溶液对凝胶进行染色，然后在紫外光照射下观察核酸条带的橘黄色荧光。紫外分光光度法用于定量溶液中有关物质含量；地衣酚试剂常用于定量溶液中的RNA，二苯胺用于定量溶液中的DNA。

D

[考点] 质粒、染色质概念。
   [解析] 在染色体外还有游离的小的环状DNA分子，称为质粒(plasmid)。除细菌外，酵母和其他真菌中也有质粒。由于质粒与抗性有关，而且可以携带基因在物种间转移，因此成为现代分子生物学技术中基因分离、克隆和转移的主要工具。核糖体是蛋白质合成场所。染色质是在细胞分裂间期分散在核内的丝状物，可被碱性染料着色，能在电镜下观察到，它们由DNA分子和蛋白质一起组成，在细胞分裂期以染色体形式出现。

A

[考点] 人类基因组。
   [解析] 人类基因组大小在3亿碱基对左右。有不同数字，大多在2.9×10⁹～3.3×10⁹bp(2.9×10⁶～3.3×10⁶kb)。

D

[考点] DNA双螺旋模型提出者。
   [解析] 1953年，Watson and Crick共同提出DNA双螺旋结构模型。

B

[考点] DNA双螺旋模型。
   [解析] 由于DNA双螺旋模型第一次呈现了遗传信息的储存方式(碱基顺序)以及DNA复制的分子机理(碱基互补)，揭示了生物遗传的内在规律，为分子遗传学、分子生物学的研究拉开了序幕，人们不仅非常熟悉Watson和Crick两位科学家，而且对模型的提出年代非常关注。

D

[考点] 生物化学著名科学家的成就。
   [解析] Hoppe-Seyler是生物化学学科建立之初贡献最大的科学家之一，他于1877年创办《生理化学杂志》。DNA测序始发于20世纪70年代，著名的科学家有Sanger等。

D

[考点] DNA回文结构特点。
   [解析] 回文结构主要特点是：含有反向重复序列，且出现在DNA两条链中呈二重对称。B属于镜像重复，即反向重复序列在同一条DNA链中。限制性内切酶识别序列通常是回文结构。

A

[考点] 核苷与核苷酸的区别。
   [解析] 核苷酸是由核糖、碱基和磷酸基团组成的。核苷与核苷酸的区别在于前者没有磷酸基团。AMP、ADP、ATP都属于核苷酸，只是磷酸基团数量不同。

D

[考点] DNA连键。
   [解析] DNA连键性质是3′，5′-磷酸二酯键。3′、5′特指核糖上的碳原子编号。碱基上的原子编号没有“′”。

核苷酸由戊糖、磷酸和碱基以1:1:1的分子比例组成，戊糖环上的C1与嘧啶碱基的N1(或嘌呤碱基的N9)以β-糖苷键相连；戊糖的C5与磷酸基团以5′-磷酯键相连。
   核苷酸种类很多，功能也是多方面的。
   (1)组成核酸的核苷酸是5′-核苷酸。其中5′-脱氧核糖单核苷酸(dAMP, dTMP, dCMP, dGMP)是生物遗传物质——DNA的基本结构单位；5′-核糖单核苷酸(AMP, UMP, CMP, GMP)是各种RNA的基本结构单位。RNA在蛋白质合成、基因表达、调控中起重要作用。
   (2)腺苷三磷酸——ATP，作为能量的瞬时载体，在生物大分子合成、细胞运动、物质运输、生物发光等生命活动中发挥作用，另外还在分子间磷酸基团转移中起“中转站”作用。
   (3)核苷酸还参与许多辅酶、辅基的组成。
   (4)环腺苷酸是细胞通信的媒介，在细胞信号转导中发挥作用。

化学组成：RNA的基本结构单元是核苷酸，由核糖、磷酸和A、U、C、G四种碱基以1:1:1的分子比例组成；DNA的基本结构单元是脱氧核苷酸，由2′-脱氧核糖、磷酸和A、T、C、G四种碱基以1:1:1的分子比例组成。
   连键性质：RNA和DNA的连键性质相同。核糖(或脱氧核糖)环上的_C1与嘧啶碱基的_N1(或嘌呤碱基的N9)以β-糖苷键相连；核糖(或脱氧核糖)的C5与磷酸基团以5′-磷酯键相连。核苷酸(或脱氧核苷酸)之间都以3′，5′-磷酸二酯键相连。
   生物功能：DNA的功能是作为细胞遗传物质。RNA种类多，功能具有多样性。①控制蛋白质合成。其中tRNA的任务是携带活化的氨基酸，rRNA则构成蛋白质合成的场所，mRNA作为信使以蛋白质合成模板的形式将遗传信息从DNA传递到蛋白质。②参与RNA转录后加工与修饰。如L-19RNA的自我剪接。③基因表达与调控。如小分子RNA的作用。④作为遗传物质。如病毒RNA。⑤生物催化。如某些核酶具有氨酰酯水解活性和肽基转移酶活性。此外，RNA在生物进化中具有重要作用。

“restriction endonuclease"即限制性内切酶，DNA核酸酶的一种，是细菌体内存在的一类核酸内切酶，它可以识别外源DNA的特征序列并与之结合，从而限制外源DNA表达、避免入侵DNA干扰本身的遗传稳定性。
   限制性内切酶的作用特点是：①专一性识别具有迥文特征的DNA序列，定点切断磷酸二酯键；②切断DNA双链时形成黏性末端或平头末端。
   在研究中，限制性内切酶在DNA重组与基因鉴定中有广泛用途。如突变种鉴定、DNA限制图谱的制作等。

(1)核酸在近紫外区有光吸收，吸收峰在260nm；
   (2)在260nm，单链DNA比双链DNA吸收值高(即增色效应)。

(1)SDS：作为去污剂和蛋白质变性剂，可以破坏细胞膜，变性蛋白质，抑制酶类活性，促进完整核酸分子从细胞中释放出来。
   (2)EDTA：Mg²⁺是DNA酶的辅因子。EDTA作为二价离子螯合剂，可以消除溶液中自由的Mg²⁺，使DNA酶失去活性，从而保护DNA分子不被水解。
   (3)酚/仿试剂：抽提除去核酸提取物中的膜类物质和蛋白质。
   (4)乙醇：沉淀DNA，也可以用来洗除DNA沉淀中的杂质。
   (5)溴化乙锭：作为核酸专一性荧光染料嵌入双螺旋中，使分离的核酸条带在紫外光照射下能显现出来。

可用紫外吸收法。通过用紫外分光光度计测定样品在260nm和280nm光密度值(OD₂₆₀，OD₂₈₀)，然后计算OD₂₆₀，OD₂₈₀的比值。如果DNA样品的OD₂₆₀，OD₂₈₀比值大于1.8，RNA的OD₂₆₀，OD₂₈₀比值大于2.0，一般被视为高纯度样品。如果低于这些数字，表明核酸溶液中含有蛋白质等污染。此方法可以了解核酸制品的大致纯度，快速判断样品中是否有明显蛋白质污染。

(1)紫外吸收法。核酸在260nm有紫外吸收峰，在260nm测定光吸收值A₂₆₀即OD₂₆₀。如果是双螺旋DNA样品，A值为1相当于50/μg/mL；若是RNA样品或单链DNA，A值为1相当于40μg/mL，从而可以计算获得核酸样品含量。
   (2)琼脂糖凝胶电泳。利用一个已知含量的DNA样品作为标准，在同一个凝胶上进行电泳，溴化乙锭(EB)染色后，根据电泳条带粗细判断核酸样品的含量。
   相比较而言，紫外吸收法快速、准确，而且不浪费样品，但要求样品达到一定纯度。琼脂糖凝胶电泳法对样品纯度要求不高，而且在已知浓度DNA作参考的情况下，样品浓度测定更为准确。
   (此外，还有一些传统的旧方法：钼蓝比色法是通过测定磷含量对核酸定量；地衣酚显色法是通过测定RNA的戊糖含量对RNA定量；二苯胺显色法是通过测定DNA的脱氧核糖含量对DNA定量。这些方法已逐渐被现代方法替代。)

(1)(c)。(因为核酸样品为不完全水解产物，只有带有放射性标记的可以显出条带)
   (2)CTACGTA。(因为放射性标记的是5′端，越小的标记片段迁移速度越快，必须自下而上读序)。

核酸分子在电泳中的迁移速度与环境和自身状态有关。迁移速度与电场强度、电泳胶的浓度、核酸分子大小、核酸分子构象等有关。在相同电泳条件下，核酸分子越小，迁移速度越快。同种质粒DNA，分子量相同。对同一种质粒DNA进行分析时出现三条电泳带，是构象不同引起的。构象不同的同种核酸分子迁移速度不同，超螺旋DNA的迁移速度大于线性DNA，线形DNA又大于环状DNA。
   因此，在电泳凝胶上，迁移速度从快到慢的三条带应该是：超螺旋DNA→线性DNA→环状DNA。

无论哪种介质，都是按分子的大小来分离核酸的。比较而言，琼脂糖电泳对核酸大小的分离范围更广，从质粒DNA到基因组DNA，都可以通过凝胶浓度的调节对核酸进行有效分离、分析；由于琼脂糖中常含有核酸酶，因此如果是RNA样品，应该注意在变性条件下进行电泳。相对于琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶孔径要小得多，适合分析小于1000bp的DNA片段或RNA；聚丙烯酰胺凝胶不含核酸酶，更适合RNA样品的分离、分析。

①与蛋白质相比，核酸分子密度大，黏度大；②与蔗糖相比，氯化铯溶解度大，可制成高浓度、高密度的溶液；氯化铯黏度小，易扩散，有利于核酸的分离。因此，氯化铯密度梯度更常用于核酸分离。
   核酸样品经过氯化铯密度梯度离心后，各成分按自身密度不同分别处于离心管的不同位置。就不同大分子来讲，RNA密度＞DNA密度＞蛋白质密度，因此，超离心后RNA位于离心管最下方，蛋白质位于最上层，DNA分子位于中间。就不同构象的DNA而言，其分子密度表现为：超螺旋DNA＞线性DNA；对于同种DNA分子来讲，单链DNA密度大于双链DNA密度；对于G-C含量不同的DNA，G-C含量越高，核酸分子密度越大。可见这些样品都可以选用氯化铯密度梯度超离心法进行分离。

(1)琼脂糖电泳
   原理：两种形式的DNA电泳迁移率不同，单链的DNA迁移快。
   (2)氯化铯密度梯度超离心
   原理：两种形式的DNA密度不同，单链DNA比双链DNA密度大，沉降速度快。
   (3)羟基磷灰石柱层析
   原理：两种形式的DNA吸附能力不同，双链DNA与羟基磷灰石结合更紧。

天然核酸在某些物理及化学因素(如过酸、过碱、过热、加变性剂)作用下，双螺旋区因氢键断裂变成单链，紫外吸收升高，黏度下降，生物活性全部或部分丧失。这种现象称为核酸的变性。在适当条件下，DNA变性后的两条分开的核苷酸链可以靠氢键重新结合成为双螺旋，使其物理、化学及生物活性得到恢复，这便是核酸复性。
   通过核酸的变性和复性操作，可使两条来源不同、但有碱基序列互补关系的DNA单链分子之间或DNA单链分子与RNA分子之间，在互补区段形成双链DNA分子或DNA/RNA异质双链分子，即核酸的分子杂交。分子杂交在分子生物学研究中用途广泛。
   如DNA印迹。是一种利用分子杂交原理鉴定DNA的方法。技术要点是：将DNA样品进行限制性内切酶处理，并用琼脂糖凝胶电泳将不同长度的DNA进行分离，然后将DNA变性并原位转移至滤膜，与带有标记的核酸探针(已知序列)进行杂交反应，从而使能与探针互补的DNA片段得到检测。DNA印迹可用来鉴定不同物种间是否存在同源基因，或鉴定转基因生物是否已有外源基因的整合，也可用于鉴定同一生物某一基因的拷贝数。
   (或以RNA印迹为例。RNA印迹在操作过程中也利用了核酸的变性、复性原理，常用来在mRNA水平研究基因的表达规律。)